支原體檢測是細(xì)胞培養(yǎng)和相關(guān)生物制品的重要質(zhì)控方案，但不同的應(yīng)用場景需要選用不同的檢測試劑盒。試劑盒的選擇主要考慮幾個(gè)因素：

1，質(zhì)控的等級(jí)要求；

等級(jí)要求最高的，是細(xì)胞與基因治療產(chǎn)品的最終檢測，成品檢測或放行檢。可選高靈敏度檢測試劑盒，需要較高的檢測靈敏度，至少達(dá)到10CFU/每劑，特異性要求也最高，必須無假陽性，假陰性。相對(duì)應(yīng)地，樣本需要經(jīng)過復(fù)雜的前處理過程，包括支原體富集，核酸抽提，然后采用高靈敏度QPCR檢測試劑（擴(kuò)增45個(gè)循環(huán)，陽性閾值定為40個(gè)循環(huán)）。高靈敏試劑對(duì)整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作對(duì)環(huán)境和操作過程要求高，稍有疏漏，會(huì)出現(xiàn)假陽性或擴(kuò)增曲線翹尾。

對(duì)于細(xì)胞和基因治療產(chǎn)品中間研發(fā)過程的質(zhì)控，等級(jí)要求可以適當(dāng)放寬，靈敏度在100-10CFU是可以被接受的，并且很多情況下為了簡化操作，往往采取直擴(kuò)的方案，即直接在QPCR體系中加入細(xì)胞上清或懸浮液進(jìn)行檢測（擴(kuò)增40個(gè)循環(huán)，陽性閾值定為35個(gè)循環(huán)）；若想進(jìn)一步提高靈敏度可采取濃縮裂解的方案，即細(xì)胞上清通過高速離心后去掉上清，加入裂解液處理。

對(duì)于科研細(xì)胞房使用，可選用科研版直擴(kuò)檢測法，擴(kuò)增35個(gè)循環(huán)，陽性閾值定為32個(gè)循環(huán)，實(shí)驗(yàn)對(duì)環(huán)境無菌要求不高，相應(yīng)地，靈敏度要求也不高，直接上清加樣，不需要對(duì)樣本特殊處理，靈敏度在1000-100CFU，如若要節(jié)約成本，可采取混和樣本檢測。

2，經(jīng)濟(jì)成本；

高靈敏QPCR檢測試劑盒，需要進(jìn)行樣本抽提，靈敏度高，需要配備熒光定量PCR儀，成本高；直擴(kuò)QPCR檢測試劑盒，不需要抽提和特殊樣本前處理，靈敏度中等，成本中等；科研版支原體檢測試劑盒，可混樣檢測，成本較低。

3，操作的復(fù)雜程度。

高靈敏QPCR檢測法需要濃縮，抽提樣本，可批量操作，操作難易程度中等，對(duì)實(shí)驗(yàn)人員有一定的要求，操作時(shí)間4-8小時(shí)；直擴(kuò)QPCR檢測法和科研版直擴(kuò)法，操作比較簡單，只需要加樣上機(jī)即可，操作時(shí)間1-3小時(shí)即可。

結(jié)合以上因素，總結(jié)如下：

高靈敏度：高靈敏支原體QPCR檢測試劑盒（成品放行檢，提高速率，但成本中等）。

快速便捷：直擴(kuò)支原體QPCR檢測試劑盒（平衡速度與成本，設(shè)備要求低，適合中間質(zhì)控環(huán)節(jié)）。

    成本至上：科研版支原體檢測試劑盒（節(jié)約成本，適合科研細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室）。